大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒

【產(chǎn)品 名稱(chēng)】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

【英文 名稱(chēng)】：Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA KIT

【檢測 方法】：酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)

【品 牌】 : Ek-Bioscience/進(jìn)口品牌

【規 格】 : 96T/48T

【價(jià) 格】 ：800-2680元（以詢(xún)價(jià)為準）

【產(chǎn) 地】 ：China/USA

【說(shuō)明書(shū)】 ：請通過(guò)或向咱公司銷(xiāo)售免費索要，將竭誠為您服務(wù)。

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【基本原理】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

ELISA檢測的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過(guò)反應而結合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

【實(shí)驗準備】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1. ELISA試劑盒及待測樣本

2. 酶標儀(450nm波長(cháng)濾光片)

3. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭

4. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

5. 吸水紙

【標本要求】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1.血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

2.血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應再次離心。

3.尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4.細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

5.培養細胞:

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

6.組織標本:

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

7.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

【試劑盒組成】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

96T/Kit (8*12 strips)

30倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶

酶標包被板 12孔× 8 條

酶標試劑 6ml× 1 瓶

樣品稀釋液 6ml× 1 瓶

顯色劑A 液 6ml× 1 瓶

顯色劑B 液 6ml× 1/ 瓶

終止液 6ml× 1 瓶

標準品 0.5ml× 1 瓶

標準品稀釋液 1.5ml× 1 瓶

說(shuō)明書(shū) 1份

封板膜 2片（96 ）

密封袋 1個(gè)

48T/Kit (8*6 strips)

20倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶

酶標包被板 12孔×4條

酶標試劑 3ml×1 瓶

樣品稀釋液 3ml×1 瓶

顯色劑A 液 3ml×1 瓶

顯色劑B 液 3ml×1/ 瓶

終止液 3ml×1 瓶

標準品 0.5ml× 1 瓶

標準品稀釋液 1.5ml× 1 瓶

說(shuō)明書(shū) 1份

封板膜 2片（48）

密封袋 1個(gè)

【操作步驟】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，依次進(jìn)行稀釋數倍。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

【計算結果】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

【注意事項】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

【操作事項】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。 實(shí)驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì )導致不同的 “預孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時(shí)間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。

3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時(shí)將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應嚴格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4. 洗滌：洗滌過(guò)程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過(guò)的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6. 反應時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀(guān)察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過(guò)強從而影響酶標儀光密度讀數。

7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。

建議檢測樣品時(shí)均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高，請先稀釋后再測定，計算時(shí)請zui后乘以稀釋倍數。

【洗板方法】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1. 手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過(guò)程數次。

2. 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機，應在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過(guò)程中。

【特別說(shuō)明】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

*: [96T/48T]（打開(kāi)包裝后請及時(shí)檢查所有物品是否齊全完整）

#: 一周內使用可存于4℃，需長(cháng)時(shí)間存放或多次使用建議存于-20℃，有效期6個(gè)月.

【Ek-Bioscience試劑盒特點(diǎn)體現】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1、高效、靈敏、特異的抗體；

　　2、穩定的重復性和可靠性；

　　3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

　　4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類(lèi)型；

　　5、節省實(shí)驗經(jīng)費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準確度。比如水中總無(wú)機氯含量測定，樣品水中含有無(wú)機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機氯標準樣品，測定時(shí)忽略體積變化，如果測定出樣品中無(wú)機氯為2.98mg/L，則認為回收率為99%。

【Ek-Bioscience試劑盒適用范圍】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1．適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類(lèi)型；

2．可檢測動(dòng)物類(lèi)型豐富：人、猴、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、雞、蝦、魚(yú)等

3．可檢測指標齊全：白介素，干擾素，血管緊張素，肺炎衣原體，趨化因子、生長(cháng)因子基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥因子、血管生成素 等等 指標

【Ek-Bioscience免費代測服務(wù)】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

1.每個(gè)指標需提供100微升樣品，如做復孔則200微升

2.標本離心處理后可通知我們工作人員上門(mén)取樣（僅限本市），外省可通過(guò)泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我司。

【原理】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

免疫測定技術(shù)的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開(kāi)優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái)，隨著(zhù)分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。

【ELISA用途】：大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過(guò)反應而結合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個(gè)環(huán)節的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。