1.樣品準備
首先,需要收集大鼠的血液樣品,并將其離心分離出血清。若使用其它生物樣品,需進(jìn)行相應的處理步驟,如細胞培養上清、組織勻漿等。處理過(guò)的樣品可以在-20℃的低溫下保存。
2.試劑制備
根據試劑盒說(shuō)明書(shū)中的指導,將所需的試劑按比例混合制備好,注意不同試劑之間的混合順序和稀釋倍數以及反應體系的pH值等因素。
3.樣品添加
將準備好的血清樣品加入到試劑盒提供的微孔板中,每個(gè)孔位加入適量的樣品(一般為50ul),并加入基礎液等試劑調節稀釋系數以達到所需濃度范圍。
4.反應
加入樣品后,在37℃恒溫箱內孵育一定時(shí)間(約30分鐘至1小時(shí)),使樣品中的游離脂肪酸與試劑中的抗體形成特異性免疫反應。
5.洗滌
將試劑盒提供的洗滌緩沖液加入孔位中,通過(guò)洗滌去除未結合的物質(zhì)和噪音信號,每個(gè)孔位需重復洗滌3-4次。
6.顯色
加入顯色底物反應溶液,在室溫下靜置一定時(shí)間,使產(chǎn)生特定顏色反應,約10-30分鐘后即可進(jìn)行測定。
7.測定
使用酶標儀等設備對所形成的顏色反應進(jìn)行吸光度讀數,并通過(guò)標準曲線(xiàn)計算出樣品中游離脂肪酸的含量。
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