小鼠白介素ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
小鼠白介素ELISA試劑盒操作步驟:
實(shí)驗開(kāi)始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37溶解);試劑或樣品配制時(shí)均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應對樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測范圍,計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。
1、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00,余孔分別加標準品或待測樣品100,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗結果有效性,每次實(shí)驗請使用新的標準品溶液。
2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100(臨用前配制),酶標板加上覆膜,37溫育1小時(shí)。
3、棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可拍將孔內液體拍干)。
4、每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100,加上覆膜,37溫育1小時(shí)。
5、棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、每孔加底物溶液90,酶標板加上覆膜37避光顯色(反應時(shí)間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
7、每孔加終止溶液50,終止反應,此時(shí)藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標儀在450nm波長(cháng)測量各孔的光密度(OD值)。